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氯霉素眼药水的高效液相色谱分析.ppt
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1、氯霉素眼药水的高效液相色谱分析,药物分析实验十,眼药水中的氯霉素的测定,氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素,辅料为硼酸、硼砂、氯化钠、防腐剂等,为无色或几乎无色的澄明液体。测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含量,由于滴眼液中存在的辅料的干扰,首先要分离得到氯霉素的纯样品。因此,采用高效液相色谱法来进行测试,用外标标准曲线法定量。,氯霉素,成份 A,成份 A,峰面积A样品,峰面积A对照,外标标准曲线法,色谱定量:峰面积与样品浓度成正比。,一系列已知浓度的氯霉素溶液,眼药水稀释液,C,Ai,浓度:C1,C2,C3,C4,C5峰面积:A1,A2,A3,A4,A5,液相色谱的基本流程图,流动相,高压泵,色谱柱,检测
2、器,泵输液,分离,检测,计算机,A,E,G,F,进样阀,进样,预备柱,氯霉素含量的测定,精密吸取眼药水0.5mL于50mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。,1、对照品溶液配制,2、眼药水样品配制,精密称取5.0mg氯霉素样品于10mL容量瓶中,用甲醇溶解定容,配成0.1mg/mL母液。分别移取1mL,2mL,3mL,4mL,5mL母液于10mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,配成0.01,0.02,0.03,0.04,0.05mg/mL的标准溶液。,色谱操作步骤:,1、依次打开检测器、泵的开关2、打开电脑主机,打开操作界面3、排气泡4、设置色谱条件,打开泵开关5、让流动相冲洗色谱系统,至色谱基线水平,
3、约半小时6、基线调零,填写数据文件名及信息7、进样并记录数据8、数据处理及打印报告9、冲洗色谱系统约半小时,关机。,色谱条件:,色谱仪 岛津LC-15C高效液相色谱色谱柱 C18柱(5m,1504.6mm或2504.6mm)柱温 室温流动相 甲醇水(6040)(150短柱)甲醇水(8020)(250长柱)流速 1.000ml/min波长 272nm,泵,柱,进样,排放,泵,排放,柱,进样,定量环,六通阀,Inject:插入针头Load:打入样品Inject:样品进入色谱,3、色谱测试,用清洗溶剂清洗微量进样针三次,用待测溶液润洗三次,吸取待测溶液25L,进样,得色谱图。,数据记录,标准曲线:隔两分钟进样一次,浓度从低到高,记录在一张谱图上。第二次进样时断开六通阀进样感应。,样品曲线:单独进样,单独记录谱图。,
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