实验酶联免疫吸附测定多角度.ppt
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1、酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA),免疫学教研室,基础医学院免疫学教研室,抗原-抗体反应的基本检测方法,凝集反应(agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应。,沉淀反应(precipitation):可溶性抗原与抗体的反应。,补体参与的反应,免疫标记技术(immunolabelling technique):用示踪物质标记抗原或抗体,进行抗原-抗体反应的检测。,基础医学院免疫学教研室,用示踪物质标记抗体或抗原,使其与相应的抗原或抗体反应,使微量的、不可见的反应成为可见的或可测定的。,免疫标记技术,基础医学院免疫学教研室,
2、用FITC-抗IgM单抗计数B细胞,免疫荧光技术,基础医学院免疫学教研室,课程内容,ELISA的原理ELISA的分类间接ELISA的具体操作ELISA在医学中的应用实例,基础医学院免疫学教研室,酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA),酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),原理:将抗原(抗体)固相化,与酶标记的相应抗体(抗原)结合后,加入该酶作用的底物,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或定量分析。方法:直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA、竞争ELISA等,基础
3、医学院免疫学教研室,ELISA的原理,1.抗原抗体反应的特异性 2.抗原或抗体的固相化 3.抗原或抗体的酶标记,E,基础医学院免疫学教研室,ELISA的分类,(一)直接法(二)间接法(三)双抗体夹心法(四)竞争法,基础医学院免疫学教研室,直接ELISA,酶标一抗,基础医学院免疫学教研室,间接法的原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。其优点在于只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。可用于传染病的诊断。,间接法(测抗体),基础医学院免疫学教研室,夹心(检测抗原),只要获得针对受检抗原的特异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法
4、。此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP等。,基础医学院免疫学教研室,竞争抑制法(检测抗原)待检抗原与标记抗原竞争结合抗体。,小分子抗原或半抗原缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。,基础医学院免疫学教研室,标准HBcAg,wash,待检HBcAb,当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体;如HBeAb,HBcAb;,基础医学院免疫学教研室,间接ELISA,实验目的:测小鼠IgG免疫兔血清中抗小鼠IgG抗体的效价实验材料:包被抗原:
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