分子实验基本操作培训教学课件.ppt
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1、分子分子实验基本操作培基本操作培训余涛,郑勤思2008-4-13IGEM PKUIGEM PKUCount GroupCount GroupOutlinevv分子分子分子分子实验实验基本流程介基本流程介基本流程介基本流程介绍绍vv分子分子分子分子实验实验基本操作的原理、步基本操作的原理、步基本操作的原理、步基本操作的原理、步骤骤及注意事及注意事及注意事及注意事项项vv总结总结IGEM PKUIGEM PKUCount GroupCount Group分子分子实验基本流程介基本流程介绍vv感受感受感受感受态态的制的制的制的制备备vvPCRPCR克隆目的片断克隆目的片断克隆目的片断克隆目的片断vv
2、酶酶切及切及切及切及酶酶切片断回收(切片断回收(切片断回收(切片断回收(电电泳)泳)泳)泳)vv连接连接连接连接vv小提小提小提小提质质粒并粒并粒并粒并酶酶切切切切鉴鉴定(定(定(定(电电泳)泳)泳)泳)vv大大大大肠肠杆菌的培养杆菌的培养杆菌的培养杆菌的培养vv转化转化转化转化IGEM PKUIGEM PKUCount GroupCount Group分子分子实验基本流程介基本流程介绍vv感受感受感受感受态态的制的制的制的制备备vvPCRPCR克隆目的片断克隆目的片断克隆目的片断克隆目的片断vv酶酶切及切及切及切及酶酶切片断回收(切片断回收(切片断回收(切片断回收(电电泳)泳)泳)泳)vv转
3、转化化化化vv连连接接接接vv小提小提小提小提质质粒并粒并粒并粒并酶酶切切切切鉴鉴定(定(定(定(电电泳)泳)泳)泳)vv大大大大肠肠杆菌的培养杆菌的培养杆菌的培养杆菌的培养IGEM PKUIGEM PKUCount GroupCount Group分子分子实验基本操作基本操作大大肠杆菌的培养杆菌的培养vv原理原理原理原理 大大大大肠肠杆菌在杆菌在杆菌在杆菌在37 37 下在下在下在下在较较好好好好较较快的快的快的快的进进行增殖,行增殖,行增殖,行增殖, 4 4 下下下下则则可可可可较较好停止代好停止代好停止代好停止代谢谢,便于保存。(,便于保存。(,便于保存。(,便于保存。(长长期保存期保存
4、期保存期保存应应在在在在-80 -80 用用用用15-20%15-20%甘油甘油甘油甘油冻冻存)存)存)存) 由于由于由于由于转转入的入的入的入的质质粒粒粒粒带带有抗性有抗性有抗性有抗性标记标记,用,用,用,用带带有抗生素的培有抗生素的培有抗生素的培有抗生素的培养基即可养基即可养基即可养基即可进进行行行行选择选择性培养。性培养。性培养。性培养。vv分分分分为为固体培养基培养和液体培养基培养固体培养基培养和液体培养基培养固体培养基培养和液体培养基培养固体培养基培养和液体培养基培养 IGEM PKUIGEM PKUCount GroupCount Group分子分子实验基本操作基本操作大大肠杆菌的
5、培养杆菌的培养vvStep0: LBStep0: LB培养基的配制培养基的配制培养基的配制培养基的配制(1L(1L培养基含培养基含培养基含培养基含) ) 10g Tryptone 10g Tryptone 5g Yeast Extract 5g Yeast Extract 10g NaCl 10g NaCl 15g Agar 15g Agar ( (仅仅在固体培养基中加入,注意在固体培养基中加入,注意在固体培养基中加入,注意在固体培养基中加入,注意琼琼脂脂脂脂为为AgarAgar琼琼脂糖脂糖脂糖脂糖/Agarose/Agarose区分区分区分区分) ) 1L 1L 去离子水去离子水去离子水去离
6、子水vv一般一瓶配一般一瓶配一般一瓶配一般一瓶配100-300mL100-300mLvvStep0: Step0: 灭灭菌(此后一切保持无菌操作)菌(此后一切保持无菌操作)菌(此后一切保持无菌操作)菌(此后一切保持无菌操作) IGEM PKUIGEM PKUCount GroupCount Group分子分子实验基本操作基本操作大大肠杆菌的培养杆菌的培养固体培养基培养固体培养基培养固体培养基培养固体培养基培养 (用于(用于(用于(用于筛选筛选或短期保存菌种)或短期保存菌种)或短期保存菌种)或短期保存菌种)vvStep1: Step1: 倒板倒板倒板倒板 微波炉加微波炉加微波炉加微波炉加热热培养
7、基培养基培养基培养基 - - 室温冷却至室温冷却至室温冷却至室温冷却至60 60 左右左右左右左右 - - 移入超移入超移入超移入超净净台,加入抗生素(台,加入抗生素(台,加入抗生素(台,加入抗生素(1000*1000*的,即需稀的,即需稀的,即需稀的,即需稀释释10001000倍),倍),倍),倍),摇摇匀匀匀匀 - - 趁趁趁趁热热快速倒入平板,快速倒入平板,快速倒入平板,快速倒入平板,12mL/12mL/板板板板 - - 超超超超净净台内室温台内室温台内室温台内室温冷却凝固冷却凝固冷却凝固冷却凝固vvStep2: Step2: 接种接种接种接种 划划划划线线法:法:法:法:烧红烧红接种接
8、种接种接种环环 - - 冷却冷却冷却冷却 - - 蘸上菌液蘸上菌液蘸上菌液蘸上菌液 - - 在平板在平板在平板在平板上划上划上划上划线线 -灼灼灼灼烧烧接种接种接种接种环环。 多用于菌种保存多用于菌种保存多用于菌种保存多用于菌种保存 平平平平铺铺法:用玻璃刮刀将菌液法:用玻璃刮刀将菌液法:用玻璃刮刀将菌液法:用玻璃刮刀将菌液铺铺干与平板上,多用于干与平板上,多用于干与平板上,多用于干与平板上,多用于转转化化化化 IGEM PKUIGEM PKUCount GroupCount Group分子分子实验基本操作基本操作大大肠杆菌的培养杆菌的培养固体培养基培养固体培养基培养固体培养基培养固体培养基培
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