二十六章急胃肠炎病毒.ppt
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1、 第二十六章第二十六章 急性胃肠炎急性胃肠炎病毒病毒腹泻是其主要症状。病因有四个病毒科:腹泻是其主要症状。病因有四个病毒科:(1 1)呼肠病毒科的轮状病毒;呼肠病毒科的轮状病毒; (2 2)杯状病毒科的人类杯状病毒;杯状病毒科的人类杯状病毒; (3 3)腺病毒科的肠道腺病毒;腺病毒科的肠道腺病毒;(4 4)星状病毒科的星状病毒。星状病毒科的星状病毒。抵抗力抵抗力RVRV抵抗力较强,在粪便中能存活数天抵抗力较强,在粪便中能存活数天到数周,耐乙醚、耐酸碱,在到数周,耐乙醚、耐酸碱,在pH3.5pH3.51010仍可保持其感染性。仍可保持其感染性。56305630minmin可被可被灭活。也可被消毒
2、剂灭活,如酚、甲灭活。也可被消毒剂灭活,如酚、甲醛、氯和异丙内醇等。醛、氯和异丙内醇等。 微生物检验微生物检验1.1.发发病病早早期期采采集集腹腹泻泻粪粪便便,加加9 9倍倍量量PBSPBS制制成成1010悬液,悬液,30003000r rminmin离心离心1010minmin,取上清冻存。取上清冻存。2.2.标本直接电镜和免疫电镜检查标本直接电镜和免疫电镜检查 取便抽出取便抽出 液超速离心,取沉渣经醋酸钠染色电镜观液超速离心,取沉渣经醋酸钠染色电镜观 察,或进行免疫电镜观察,由于病毒颗粒察,或进行免疫电镜观察,由于病毒颗粒 聚集而易被检出。电镜下常见病毒颗粒,聚集而易被检出。电镜下常见病毒
3、颗粒, 60-80 60-80nmnm大小,有双层壳,核心呈放射状,大小,有双层壳,核心呈放射状, 类似车轮排列,此为完整病毒颗粒,空心类似车轮排列,此为完整病毒颗粒,空心 的是不完整病毒颗粒。的是不完整病毒颗粒。 3.3.抗原检测抗原检测常用常用ELISAELISA双抗夹心法,用组和亚组特异性双抗夹心法,用组和亚组特异性McAbMcAb配合使用,可检出配合使用,可检出A A组轮状病毒、并判组轮状病毒、并判定亚组和血清型。约有定亚组和血清型。约有5 5假阳性,系粪便假阳性,系粪便中类风湿因子所致,此假阳性可用阻断试验中类风湿因子所致,此假阳性可用阻断试验加以克服。以组特异性抗体附着乳胶颗粒,加
4、以克服。以组特异性抗体附着乳胶颗粒,加粪便抽出液进行凝集反应。具较好的特异加粪便抽出液进行凝集反应。具较好的特异性,但不及性,但不及ELlSAELlSA法敏感法敏感 。3.病毒病毒RNARNA的的PAGEPAGE分析分析从从1010粪便悬液中粗提病毒粪便悬液中粗提病毒RNARNA,经经PAGEPAGE电泳,泳动后经硝酸银染色进行分析,根电泳,泳动后经硝酸银染色进行分析,根据据A A、B B、C C三组三组RV 11RV 11个基因片段电泳位个基因片段电泳位置的特殊分布图形进行判断。第一组包括置的特殊分布图形进行判断。第一组包括1-41-4片段,第二组为片段,第二组为5-65-6片段,第三组为片
5、段,第三组为7-97-9片段,第四组为片段,第四组为10101111片段。根据片段。根据A A组组RVRV的的第第1010、1111片断在片断在PAGEPAGE上的迁移率不同分为上的迁移率不同分为两型,即长型和短型。两型,即长型和短型。4 4检测核酸检测核酸核酸杂交,用地高辛等标记组特异性探核酸杂交,用地高辛等标记组特异性探 针针( (VP6VP6基因基因) )或型特异性探针或型特异性探针 ( (VP4VP4或或 VP7VP7基因型特异性序列基因型特异性序列) )检测轮状病毒检测轮状病毒RNARNA;PCRPCR技术既可用于诊断,又可用于分型。技术既可用于诊断,又可用于分型。 由于扩增由于扩增
6、RVRV的的RNARNA基因片段,首先需将特基因片段,首先需将特 异片段逆转录成异片段逆转录成cDNAcDNA,但粪便中存在抑但粪便中存在抑 制逆转录物质,使该法灵敏度受到一制逆转录物质,使该法灵敏度受到一 定影响。定影响。5.病毒分离培养病毒分离培养 用用原原代代猴猴肾肾细细胞胞和和传传代代非非洲洲绿绿猴猴肾肾( (MAl04)MAl04),分分离离病病毒毒的的粪粪便便标标本本,胰胰酶酶预预处处理理(10(10g gml),ml),并并在在培培养养液液中中也也加加入入胰胰酶酶(0.5(0.51.01.0g gml)ml),有有利利于于病病毒毒的的生生长长。3737旋旋转转培培养养。经过几代培
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