优秀课件推选Western_blot实验原理和技术.ppt
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1、 Western blottingn为什么要作蛋白质印迹实验?为什么要作蛋白质印迹实验?q研究一些体外的蛋白质分子,寻找目的蛋白是否存研究一些体外的蛋白质分子,寻找目的蛋白是否存在样品当中在样品当中q蛋白质的表达情况,上调或下调表达,在不同的样蛋白质的表达情况,上调或下调表达,在不同的样品中,如疾病和正常的样品之间的表达差异性。品中,如疾病和正常的样品之间的表达差异性。定义:n印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。n1975年,Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上,并利用DNARNA杂交检测特定的DNA片段的方
2、法,称为Southern印迹法。n而后人们用类似的方法,对RNA和蛋白质进行印迹分析,对RNA的印迹分析称为Northern印迹法,对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法,对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法Towbin, H., et al. (1979). Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 7
3、6, 4350-4354.Western Blot基本原理基本原理 在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体,然后用这种多肽的特异抗体来检测。Western Blotting 方法一: 直接法n优点:q1.快速(一种抗体)q2.没有二抗交叉反应引起的非特异性条带n缺点:q1.免疫反应性降低q2.无信号二级放大q3.抗体标记费时昂贵,使用不方便Western Blotting 方法二: 间接法n优点:q1. 免疫特异性不受标记影响q2. 信号放大灵敏度高(多个二抗结合位点)q3. 多种标记的二抗可供选择q4. 可选择不同的Markern缺点:q1. 交叉反应引起的非特异性条带q2
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