临床基因扩增检验操作规范.ppt
《临床基因扩增检验操作规范.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《临床基因扩增检验操作规范.ppt(61页珍藏版)》请在启牛文库网上搜索。
1、临床基因扩增检验操作规范临床基因扩增检验操作规范浙浙江江省省基基因因诊诊断断中中心心浙江大学医学院附属儿童医院浙江大学医学院附属儿童医院尚世强尚世强一、临床基因扩增检验实验室的一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其各室的功能规范化设置及其各室的功能二、各阶段操作要求二、各阶段操作要求三、三、PCR污染与对策污染与对策四、因操作欠规范导致的问题分析四、因操作欠规范导致的问题分析一、临床基因扩增检验实验室的一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其各室的功能规范化设置及其各室的功能规范化设置:规范化设置:要求参照要求参照临床基因扩增检验实临床基因扩增检验实验室管理暂行办法验室管理暂行办法(卫医
2、发(卫医发200210号文)附件号文)附件临床基因扩增检验实验临床基因扩增检验实验室基本设置标准室基本设置标准。1 1. .四个隔开的工作区域中每一区域都须有四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用专用的仪器设备。的仪器设备。2 2.明确的明确的标记标记,如加样器或试剂等。,如加样器或试剂等。3. 3.单一方向单一方向顺序,从试剂贮存和准备区、顺序,从试剂贮存和准备区、标本标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区。称扩增区)至产物分析区。4. 4.使用使用不同颜色不同颜色或有明显区别标志的工作服。或有明显区别标志的工作服。5.5.实验
3、室的实验室的清洁清洁应按试剂贮存和准备区至扩增应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。产物分析区的方向进行。6. 6.各自各自的清洁用具。的清洁用具。各室功能:各室功能:(一)试剂贮存和准备区(一)试剂贮存和准备区功能:功能:贮存试剂的制备、试剂的分装和主贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备反应混合液的制备。 含含含含反反反反应应应应混混混混合合合合液液液液的的的的离离离离心心心心管管管管或或或或试试试试管管管管在在在在冰冰冰冰冻冻冻冻前前前前都都都都应快速离心数秒。应快速离心数秒。应快速离心数秒。应快速离心数秒。戴手套。戴手套。戴手套。戴手套。工作结束后必须立即对工作区进行
4、工作结束后必须立即对工作区进行工作结束后必须立即对工作区进行工作结束后必须立即对工作区进行清洁清洁清洁清洁。实验台表面,使用可移动紫外灯(实验台表面,使用可移动紫外灯(实验台表面,使用可移动紫外灯(实验台表面,使用可移动紫外灯(254254nmnm波长)波长)波长)波长)照射,一般照射过夜。照射,一般照射过夜。照射,一般照射过夜。照射,一般照射过夜。实验室及其设备的使用必须有实验室及其设备的使用必须有实验室及其设备的使用必须有实验室及其设备的使用必须有日常记录日常记录日常记录日常记录。 (二)标本制备区(二)标本制备区功能:功能:临床标本的保存,核酸(临床标本的保存,核酸(RNA、DNA)提取
5、、贮存及其加入至扩增反应提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定管和测定RNA时时cDNA的合成。的合成。要要要要正确正确正确正确使用加样器。使用加样器。使用加样器。使用加样器。正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必须须须须盖好盖好盖好盖好含反应混合液的反应管。含反应混合液的反应管。含反应混合液的反应管。
6、含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料,必须有对具有潜在传染危险性的材料,必须有对具有潜在传染危险性的材料,必须有对具有潜在传染危险性的材料,必须有明确明确明确明确的样的样的样的样本处理和灭活程序。本处理和灭活程序。本处理和灭活程序。本处理和灭活程序。用过的加样器吸头必须放入专门的消毒容器内。用过的加样器吸头必须放入专门的消毒容器内。用过的加样器吸头必须放入专门的消毒容器内。用过的加样器吸头必须放入专门的消毒容器内。用于用于用于用于RNARNA扩增检测的样本制备好以后,应扩增检测的样本制备好以后,应扩增检测的样本制备好以后,应扩增检测的样本制备好以后,应立即立即立即立即进进进进行行行
7、行cDNAcDNA合成。合成。合成。合成。 (三)扩增区(三)扩增区功能:功能:DNA或或cDNA扩增扩增。已已制制备备的的DNA模模板板和和合合成成的的cDNA的的加加入入和和主主反反应应混混合合液液制制备备成成反反应应混混合合液等也可在本区内进行。液等也可在本区内进行。在在巢巢式式PCR测测定定中中,第第二二次次加加样样必必须在本区内进行。须在本区内进行。可可降降低低本本区区的的气气压压以以避避免免气气溶溶胶胶从从本区漏出。本区漏出。如有加样则应在超净台内进行。如有加样则应在超净台内进行。打开反应管前快速离心数秒。打开反应管前快速离心数秒。(四)扩增产物分析区(四)扩增产物分析区功能:功能
8、:扩增片段的测定。扩增片段的测定。膜膜上上微微孔孔板板上上探探针针杂杂交交方方法法、Southern转转移移、琼琼脂脂糖糖凝凝胶胶电电泳泳、聚聚丙丙烯酰胺凝胶电泳、核酸测序方法等。烯酰胺凝胶电泳、核酸测序方法等。本本区区是是最最主主要要的的扩扩增增产产物物污污染染来来源源。溴溴化化乙乙锭锭、丙丙烯烯酰酰胺胺、甲甲醛醛或或同同位位素素等等有有毒毒或或致致癌癌物物质质,注注意意实实验验人人员员的的安安全全防护防护。负压条件。负压条件。二、各阶段操作要求二、各阶段操作要求测测定定分分析析前前的的标标本本采采集集处处理理、测测定定中中的的核核酸酸提提取取、扩扩增增和和产产物物分分析析以以及测定后的结果
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 临床 基因 扩增 检验 操作 规范