1、第七章芳酸及其酯类药物的分析,药物分析教研室,Analysis of Aromatic carboxylic acids&esters,Contents,第一节 结构与性质,特点,均有苯环、羧酸或其酯 水杨酸类和苯甲酸类结构中的羧基直接与苯环相连 除了酸性基团外，各自具有本身的官能团 分子中苯环、羧酸和取代基的相互影响，使芳酸的酸性强度各有不同,第一节 结构与性质,(一)苯甲酸类,苯甲酸(benzoic acid),丙磺舒(probenecid),甲芬那酸(mefenamic acid),羟苯乙酯(ethylparoben),(二)水杨酸类,第一节 结构与性质,水杨酸 SA(salicylic
2、 acid),阿司匹林(aspirin),对氨基水杨酸钠(PAS-Na),双水杨酯salsalate,贝诺酯(Benorilate),(三)其它芳酸类,氯贝丁酯(clofibrate),布洛芬(ibuprofen),第一节 结构与性质,第二节 鉴 别,(一)铁盐,紫堇色,赭色,米黄色,第二节 鉴 别,布洛芬,第二节 鉴 别,氯贝丁酯,羟肟酸铁配位化合物,第二节 鉴 别,(二)重氮化-偶合反应,贝诺酯,橙红色,(三)氧化反应,第二节 鉴 别,甲芬那酸H2SO4深蓝色,随即变为棕绿色,(四)水解反应,第二节 鉴 别,(五)分解产物的反应,(六)UV,第二节 鉴 别,(七)IR,-COOH-OH,-
3、COOH,Ph-C,邻位取代Ph,第二节 鉴 别,N-HO-H,N-H,Ph:C=C,芳胺,酚,第三节 特殊杂质检查,一、阿司匹林,生产工艺,ASA,副产物,SA,溶液澄清度 水杨酸 易碳化物 炽灼残渣 重金属,第三节 特殊杂质检查,1.溶液澄清度(Na2CO3溶液),醋酸苯酯,水杨酸苯酯,乙酰水杨酸苯酯,阿司匹林样品0.50g，加温热至约45C的碳酸钠试液10ml溶解后，溶液应该澄清。,2.水杨酸,第三节 特殊杂质检查,二、对氨基水杨酸钠,第三节 特殊杂质检查,间氨基酚,第三节 特殊杂质检查,1.双相滴定法(Ch.P),样品0.3g,合并乙醚液,HCl滴定液滴定,消耗滴定液不得超过0.30m
4、l,第三节 特殊杂质检查,2.HPLC法(USP),色谱条件色谱柱C18，(250mm4.6mm，10m)流动相NaH2PO4(0.05M)-Na2HPO4(0.05M)-MeOH(含氢氧化四丁基胺1.9g)（425:425:150）检测波长254nm内标磺胺,间氨基酚杂质限量=10(C/W)(Ru/Rs)(%),C标准对照液浓度WPAS-Na含量Ru供试溶液中间氨基酚与磺胺峰相应值之比Rs标准溶液中间氨基酚与磺胺峰相应值之比,0.25%,第三节 特殊杂质检查,样品中含有-COOH，-SO3H基团时，选用的离子对试剂应为带正电荷的有机胺盐除离子对试剂外，还需加入磷酸盐或其它缓冲液，以控制流动相
5、的酸度，使酸性官能团解离样品中含有-NH2，-NH-基团或其它阳离子时，应选用烷基磺酸盐或硫酸盐作为离子化试剂样品中若同时含有不同性质的基团时，则以上规则选择的离子对试剂均为合理,三、二氟尼柳,第三节 特殊杂质检查,色谱柱：C18流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸检测波长：254nm供试品溶液的色谱图中如果有杂质，各杂质的峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积。,第三节 特殊杂质检查,四、甲芬那酸,铜盐原子吸收分光光度法 有关物质HPLC,五、氯贝丁酯,对氯酚GC、HPLC 挥发性杂质GC,第四节 含量测定,一、酸碱滴定法(Acid-base titration method),苯甲酸pKa 4.20
6、水杨酸pKa 2.98酸性较强,羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；分子内氢键，更增加了其极性,直接滴定,Aspirin、丙磺舒(Ch.P.BP.JP等)苯甲酸(Ch.P等)均采用本法,第四节 含量测定,1.直接滴定法,乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶 液中滴定过程易水解,中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，可消除滴定误差,Ka 36 的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定 pKa 69 的药物要用非水溶液滴定法若SA不合格，不宜采用本法,第四节 含量测定,2.水解后剩余滴定法(Residual titration after hydrolysis),取本品约1.5g，精密称定，准
7、确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，缓缓煮沸10min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4,第四节 含量测定,0.5,第四节 含量测定,3.两步滴定法(Two-step titration),Aspirin片,枸橼酸Citric acid,酒石酸Trataric acid,水解产物水杨酸SAHAc,第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc第二步：水解后剩余滴定,第四节 含量测定,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适
8、量(约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4,第四节 含量测定,计算：称取10片重 1.8240g,片粉重 0.5312g,CNaOH：0.1032mol/L,C 0.05120mol/L,标示量 0.1g V-3.02ml V0
9、-20.18ml,第四节 含量测定,二、亚硝酸钠滴定法,对氨基水杨酸钠,第四节 含量测定,三、双相滴定法(Titrimetry in two phases),苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断 因此，利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，采用双相滴定法,分出H2O层，置具塞锥形瓶乙醚层用H2O 5ml洗涤，洗液并入锥形瓶加乙醚20ml，继续用HCl滴定，至水层显持续的橙红色,第四节 含量测定,四、UV,1.直接UV法,2.离子交换-UV法,氯贝丁酯在226nm的波长处有最大吸收，但对氯酚等有关物质亦有吸收，干扰UV法的测定。根据氯贝丁酯为酯结构，不能发生电离，而有
10、关物质可发生酸性解离的性质差异，采用阴离子交换色谱分离后，采用UV法测定。,第四节 含量测定,3.CPC-UV法(Column Partition Chromatography),利用固定相酸碱性的不同进行分离利用药物和固定相起化学反应而进行分离利用生成离子对进行层析分离单纯靠选择流动相进行分离,担体：硅藻土(Celite 545)固定相：一定pH的缓冲水溶液流动相：与水不相混溶的有机溶剂(洗脱前必须先用水饱和),第四节 含量测定,a.SA测定,玻棉,磷酸-硅藻土,FeCl3-尿素-硅藻土,供试液制备用CHCl3 50ml洗涤，弃去(洗去ASA)10ml冰HAc-水饱和乙醚液(110)(使紫色
11、配位化合物被分解，SA析出)洗脱液收集于已盛有10ml甲醇和2滴HCl的50ml量瓶中，继用30mlCHCl3洗，并稀释至刻度,第四节 含量测定,测定：306nm测定供试液和SA对照品液,A供试液 A对照品液,SA与试剂生成紫色水杨酸铁配位化合物，在柱上移动慢，带窄，色泽较深若有Fe3+洗下，黄色影响测定结果 消除干扰方法：于底部拌有磷酸的硅藻土，生成不溶解的FePO4,第四节 含量测定,b.ASA测定,供试液制备洗脱 5,25mlCHCl3，弃去CHCl3洗脱 10ml冰HAc-CHCl3(110)*；85ml冰HAc-CHCl3(1100)，并稀释至100ml,测定：280nm 空白：CHCl3,NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上 用CHCl3洗脱的目的：去除中性或碱性杂质冰HAc酸化的目的：使ASA游离，易被 CHCl3洗脱,第四节 含量测定,五、HPLC,第五节 体内药物分析,Thank You!,
